Título

ANALISE DE MICRORNAS REGULADORES DA EXPRESSAO DE TRANSCRITOS ASSOCIADOS A PLURIPOTENCIA DE CELULAS TRONCO EM MODELOS DE CAMUNDONGOS COM DEFICIENCIA DE PKD1

Introdução

A doença renal policística autossômica dominante (DRPAD) é causada por mutações nos genes PKD1 ou PKD2 e caracterizada pela formação de múltiplos cistos a partir de ductos coletores, principalmente, e de outros segmentos tubulares renais. Células tronco pluripotentes associadas à formação de tais estruturas têm sido utilizadas em estudos in vitro de nefrogênese e/ou cistogênese relacionada à DRPAD. Entretanto, a associação entre transcritos integrantes de vias envolvidas em pluripotência de células tronco (MAPK/ERK) e cistogênese precisa ser mais bem analisada. Os microRNAs (miRNAs) que participam da regulação desses transcritos em tecidos renais de modelos de camundongos ortólogos à DRPAD ainda não foram validados. Objetivo: Identificar miRNAs reguladores e transcritos diferencialmente expressos associados à pluripotência de células tronco em tecidos renais de modelos de camundongos com deficiência de Pkd1.

Material e Método

Identificação computacional e validação dos níveis de expressão, por RT-qPCR, dos miRNAs reguladores e genes, normalizados pelos seus respectivos housekeepings, miR-26a e Ppia (Muñoz et al.,Sci Rep 2020). As análises foram feitas em rins de camundongos císticos com 10 a 12 semanas de idade (Pkd1flox/flox:Nestincre ou Pkd1flox/-:Nestincre, CY, n = 10) e seus controles não císticos (Pkd1flox/flox ou Pkd1flox/-, NC, n = 10); camundongos haploinsuficientes para Pkd1 (Pkd1+/-, HT, n = 6) e seus controles selvagens (Pkd1+/+, WT, n = 6); e camundongos severamente císticos com 15 dias de idade (Pkd1V/V, SC, n = 7 ) e seus controles (CO, n = 5).

Resultados

Análises computacionais transcriptômicas realizadas em nossos três modelos animais e reportadas na literatura em outros modelos deficientes em Pkd1 identificaram 10 genes diferencialmente expressos associados à regulação de pluripotência de células tronco. Foi observado aumento da expressão dos genes Stat3 e Map3k1 e diminuição do miRNA regulador Let-7a nos rins SC versus CO. Por outro lado, o gene Mapk14 apresentou expressão diminuída e seu potencial regulador, miR-21, expressão aumentada, nos rins SC versus CO. Fgf10 apresentou diminuição da expressão nos rins SC versus CO e uma tendência de aumento da expressão no grupo CY versus NC.

Discussão e Conclusões

Os resultados sugerem um efeito regulatório potencial de miR-21 sobre a expressão de Mapk14 e de miR-Let-7a sobre a expressão de Stat3, Map3k1 e Fgf10, transcritos envolvidos na pluripotência de células tronco e cistogênese em tecidos renais de modelos de camundongos com deficiência de Pkd1

Palavras Chave

microRNAs reguladores, expressão de transcritos, pluripotência de células tronco, cistogênese, modelos de camundongos com deficiência de Pkd1

Área

Ciências básicas

Instituições

Universidade Federal de São Paulo, Escola Paulista de Medicina (UNIFESP-EPM), São Paulo - São Paulo - São Paulo - Brasil

Autores

Juan José Augusto Moyano Muñoz, ANA C. Anauate, Frederico M. Ferreira, Andressa G. Amaral, Renata Meca, Milene S. Ormanji, Mirian A. Boim, Luiz F. Onuchic, Ita P. Heilberg