Título

OTIMIZAÇAO DE PROTOCOLO FISICO-QUIMICO DE DESCELULARIZAÇAO DE TRAQUEIAS SUINAS PARA USO FUTURO EM TRANSPLANTE TRAQUEAL

Objetivo

Devido às limitações inerentes a extensão da ressecção traqueal a utilização de técnicas de engenharia de tecidos se tornou uma alternativa promissora com o uso de células vias aéreas autólogas associadas a matriz extracelular. O objetivo do estudo é avaliar a concentração de Dnase necessária para o processo de descelularização.

Método

As amostras foram descongeladas e submetidas a ciclos de lavagem com detergente deoxicolato de sódio (DS), e lavagens com Dnase. Os fragmentos de traqueia foram divididos em dois grupos. O grupo 1 (n=5) foram submetidos a um ciclo de lavagem com DS e uma lavagem com Dnase (1000U), e o grupo 2 (n=5) submetidos a um ciclo de lavagem com DS e dois ciclos de lavagens com Dnase (1000U). Em cada ciclo, os fragmentos foram imersos em 25 mL de solução de DS (4%), antibiótico (1%) e antimicótico (1%), e mantidos sob agitação mecânica a 180 rpm e a 37ºC em incubadora shaker por 24h. Os fragmentos foram submetidos a lavagens com dH20 e NaCl, seguidos de lavagem com Dnase, após consistirá em um ciclo final de lavagem com dH2O e NaCl. Após o fim do processo de descelularização na luz traqueal foi separado uma fina membrana do restante da traqueia. Esse material foi submetido ao processo de liofilização e em seguida, 100mg de tecido de cada amostra foram colocados em tubos cônicos de 15 mL com 1110µL de solução de proteinase K, para extração de DNA.

Resultados

O grupo 1 apresentou 269.15 ng/mg de DNA na traqueia e 26.50 ng/mg de DNA na membrana, enquanto o grupo 2 submetido a duas lavagens com Dnase apresentou 187.40 ng/mg de DNA na traqueia e 12.20 ng/mg de DNA na membrana.

Conclusões

O aumento na concentração de DNase durante os ciclos lavagens, possibilitou a redução do DNA da traqueia suína no processo de descelularização.