Dados do Trabalho

Título

A FORMAÇAO DE AGREGADOS PLAQUETAS-NEUTROFILOS INDUZ A ATIVAÇAO DO INFLAMASSOMA NLRP3 EM VITT

Introdução

A trombocitopenia trombótica induzida por vacinação (VITT) é efeito adverso raro que pode ocorrer após a vacinação por vetor adenoviral contra COVID-19. A dimerização do PF4 endógeno com componentes do vetor viral provoca a geração de altos títulos de anticorpos anti-fator 4 plaquetário (PF4) e formação de imunocomplexos capazes de ativar plaquetas e neutrófilos por FcγRII, induzindo agregação plaquetária, NETose, trombocitopenia e formação de trombos. Nós hipotetizamos que a formação de agregados plaquetas-leucócitos pode estar envolvida na fisiopatologia do VITT, desencadeando a ativação do inflamassoma e promovendo um estado pró-trombótico.

Material e Método

57 pacientes apresentando trombose pós vacinação com Ad26.COV2. S (Janssen) e ChAdOx1-S (astrazeneca) foram classificados através de características clínicas de acordo com a probabilidade do evento se tratar de um caso de VITT, e comparados com 28 indivíduos não vacinados com sexo e idade pareados, conforme aprovação do comitê de ética institucional (CAAE-48532621.8.0000.5262 e CAAE-52396621.0.0000.5262). Mediadores tromboinflamatórios e ativação do inflamassoma por IL-18, IL-1β e caspase-1 ativada foram quantificados por ELISA no plasma. Realizou-se ensaios funcionais estimulando células primárias (sangue total, plaquetas e neutrófilos isolados) de voluntários saudáveis com plasma de pacientes VITT após ou não pré-tratamento com o anticorpo neutralizante IV.3 ou inibidor do inflamassoma NLRP3, o MCC950. Os níveis de ativação de caspase-1 foram analisados por citometria de fluxo após a incubação com YVAD-FLICA.

Resultados

Pacientes com maior probabilidade de VITT apresentavam maiores níveis de caspase-1 ativada, protease responsável pela ativação proteolítica e liberação de IL-18 e IL-1β, ambas elevadas no plasma VITT. Fatores solúveis no plasma de pacientes VITT levaram a formação de agregados plaquetas-neutrófilos YVAD-FLICA+. O bloqueio de FcγRII com IV.3 evitou a formação de agregados plaquetas-neutrófilo. Pré-tratamento com MCC950 manteve a ativação da caspase-1 em níveis semelhantes ao estímulo com plasma controle.

Discussão e Conclusões

Pacientes VITT apresentam marcadores de ativação do inflamassoma no plasma e esse induz formação de agregados plaquetas-neutrófilos de maneira dependente de FcγRII. Nossos dados indicam que interações plaquetas-neutrófilos podem contribuir para a tromboinflamação em pacientes VITT, ao induzir ativação do inflamassoma NLRP3. Esses dados elucidam eventos imunopatológicos sobre a tromboinflamação em pacientes VITT.

Palavras Chave

PLAQUETA-NEUTRÓFILO; NLRP3; PF4; VITT; COVID-19