Dados do Trabalho

Título

EXPRESSAO RELATIVA DO GENE CD2AP APOS OVERLOAD DE ALBUMINA EM PODOCITOS IN VITRO

Introdução

Na lesão glomerular, a albuminúria decorre do comprometimento da barreira de filtração glomerular, podendo se associar à lesão dos podócitos. Danos aos pedicelos, prolongamentos dos podócitos, podem levar a apagamento dos mesmos, o que leva à albuminúria progressiva. Ainda existem controvérsias em relação ao impacto da albuminúria crônica para o agravamento do apagamento de pedicelos nas podocitopatias. Estudos anteriores demonstraram infrarregulação da proteína adaptadora CD2AP após overload de 20 e 40 mg/mL de albumina em podócitos murinos in vitro. No entanto, a avaliação do efeito de albumina foi realizada somente em podócitos sem dano prévio.

Material e Método

Podócitos humanos foram cultivados a 33ºC para proliferação e a 37ºC para diferenciação por 10-14 dias e foram expostos a concentrações progressivas de albumina (0, 3, 20 e 40mg/mL) durante 24h em duas condições: com e sem tratamento por 12h com 15μg/μL de aminoglicosídeo puromicina (PAN). Foi verificada a taxa de transcrito do gene CD2AP por PCR quantitativo em tempo real utilizando RPLP0 como controle endógeno. Os dados foram expressos como valores relativos, usando o método comparativo do cycle threshold (Ct) (2-∆∆Ct). O programa SPSS foi utilizado para realizar o teste não-paramétrico de Friedman para comparação entre as exposições à albumina, considerando p<0,05 como significante. Todos os experimentos foram realizados em duplicata técnica, com n=3.

Resultados

Os valores de fold-change nas condições sem PAN foram: 1 / 0,017/ 0,044 e 0,026 e com PAN: 1 / 1,38 / 1,77 e 1,89, para as concentrações de 0, 3, 20 e 40 mg/mL de albumina, respectivamente. Não houve diferença significativa nas condições sem PAN (p=0,122) e com PAN (p=0,284).

Discussão e Conclusões

Nas condições estudadas, em podócitos humanos, nossos resultados não corroboram os anteriormente identificados, de infrarregulação do gene CD2AP após exposição à albumina em podócitos murinos in vitro, já que não houve modulação do gene CD2AP nas condições estudadas e não foi observada diferença significativa entre as condições estudadas, tanto nos podócitos sem tratamento (p=0,122) como com tratamento com PAN (p=0,284).

Palavras Chave

Podocitopatias; albulmina; podócitos; cultura de células; expressão relativa; CD2AP.