Dados do Trabalho

Título

VALIDAÇAO DA PROMISSORA METODOLOGIA SEQUENCIAMENTO NOVA GERAÇAO NA ANALISE DE QUIMERISMO NO TCTH.

Introdução

O monitoramento do quimerismo no transplante de células tronco-hematopoiética é imprescindível para acompanhamento da enxertia e pode contribuir na detecção precoce da recaída em doenças malignas. A metodologia de Sequenciamento de Nova Geração (NGS) tem sido vista como promissora por maior sensibilidade com reduzida concentração de DNA. Nosso objetivo foi validar quimerismo por NGS comparando à análise por “Short Tandem Repeats” (STR).

Material e Método

Realizadas 9 corridas, com 32 amostras (22 testes de proficiência e 10 pacientes submetidos a TCTH) utilizando kit AlloSeq HCT® (CareDx, AU), que avalia 202 regiões bialélicas de polimorfismo de nucleotídeo único, com posterior sequencimento em plataforma MiSeq (Illumina) utilizando flow cell micro e V2 , e análise no software AlloSeqHCT. Resultados foram comparados ao PCR-STR utilizando kit GlobalFiler (ThermoFisher) com 24 marcadores. Os genotipos de 26 amostras foram utilizados para determinar o ruido e a sensibilidade foi calculada utilizando amostra de quimeras artificiais.

Resultados

A correlação entre os métodos foi excelente (R2 - = 0,9994) utilizando quimeras de 0 a 100% (7 quimeras inferior a 20%, 10 quimeras de 21 a 75% e 15 quimeras acima de 75%). A sensibilidade de 0,3% foi validada com quimeras artificiais. A variação dos testes inter-ensaio e inter-tecnologista de 5 amostras realizadas em triplicatas foi no máximo de 1,21% . Coeficiente de variação dos testes intra-ensaio foram de 0,17%, 0,46%, 1,22% e 9,95% nas quimeras de 90%, 40%, 5% e 0,3%, respectivamente.

Discussão e Conclusões

A alta sensibilidade do teste (0,3%) com excelente precisão é relevante e surge como uma promissora ferramenta. Estudos prospectivos devem ser realizados para determinar a relevância clínica e indicar intervenções precoces na recaída e contribuir efetivamente no sucesso TCTH.

Palavras Chave

Quimerismo NGS Recaída