Dados do Trabalho

Título

OTIMIZAÇAO DA TECNICA DE SEQUENCIAMENTO DE SANGER DE REGIOES DO GENE UL97 PARA IDENTIFICAÇAO DE MUTAÇOES DE RESISTENCIA DO CITOMEGALOVIRUS ASSOCIADAS AO TRATAMENTO COM GANCICLOVIR

Introdução

A DNAemia do citomegalovírus humano (HCMV) segue como desafio em pacientes transplantados. Particularmente preocupante é o surgimento de cepas com mutações, frequentemente localizadas no gene UL97, que conferem resistência a antivirais de primeira linha, como ganciclovir (GCV). Estudos com foco na resistência do HCMV são limitados, tornando os dados sobre a prevalência escassos. Nesse sentido, nosso objetivo é a otimização do sequenciamento de Sanger para identificação de mutações no gene UL97 do HCMV que conferem resistência ao tratamento com GCV.

Material e Método

Amostras com carga viral de HCMV acima de 3000 cópias/mL no exame de RT-qPCR (ensaio Alinity m CMV) foram submetidas à Nested-PCR. O produto foi purificado usando a enzima ExoSAP-IT PCR Product Cleanup e sequenciado. As sequências obtidas foram alinhadas com a sequência de referência NC_006273.2 (cepa Merlin) através do software Unipro UGENE, v.47.0, e analisadas quanto à presença ou ausência de mutações que causam resistência ao GCV.

Resultados

Até o presente momento, foram sequenciadas 6 das 10 amostras coletadas de pacientes transplantados renais. Dentre as amostras sequenciadas foi identificada a mutação P509L (originada pela troca nucleotídica C143323T).

Discussão e Conclusões

Embora a mutação identificada apresente fenótipo desconhecido, através da utilização da técnica de sequenciamento de Sanger foi possível analisar as sequências nucleotídicas do fragmento que contém as principais alterações relacionadas com resistência antiviral. Assim, é possível obter informações importantes para a compreensão dos padrões mutacionais das cepas de HCMV associadas ao GCV e servir como potencial ferramenta de acompanhamento para pacientes transplantados do HCPA.

Palavras Chave

citomegalovírus
sequenciamento de Sanger
Ganciclovir
transplante renal
mutações no gene UL97