Dados do Trabalho

Título

VALIDAÇAO DO KIT ALLOSEQ HCT PARA AVALIAÇAO DE QUIMERISMO POS TRANSPLANTE DE CELULAS TRONCO HEMATOPOIETICAS

Introdução

A avaliação de quimerismo pós transplante de células tronco hematopoiéticas (TCTH) é uma forma de monitorar o enxerto, permitindo a detecção precoce de rejeição e recaída. O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho do kit AlloSeq HCT (CareDx®, Brisbane, CA), que é baseado em sequenciamento de
nova geração (NGS), em comparação ao do STR (Short Tandem Repeat).

Material e Método

Foram realizados 120 testes em 4 corridas, utilizando sequenciador MiSeq e flow cell v3-150 ciclos (Illumina, San Diego, CA). As análises foram realizadas no software AlloSeq (CareDx). Foram incluídos 34 casos previamente testados por STR, 9 misturas artificiais nas proporções 0.25%, 0.5%, 2.5%, 25%, 50% e 75% e duas misturas preparadas com amostras de 3 indivíduos. Foram avaliados casos completos, com referências do receptor e doador (n=12) e casos com apenas a referência do receptor (n=22). A reprodutibilidade intra (n=6) e inter-ensaio (n=4) também foi avaliada.

Resultados

Os resultados das misturas artificiais mostraram alta concordância entre o esperado e observado (R2=0.995), assim como os resultados obtidos por STR e NGS (R2=0.99). O software foi capaz de identificar a presença de mais de dois genótipos nas misturas com 3 indivíduos. Para avaliar a exatidão dos resultados na ausência de uma das referências, os casos completos foram reanalisados sem referência do doador. Houve alteração de resultado significativa em 5 misturas quando analisadas com duas ou uma referência (23%, 28%, 31%, 38%, 31% x 43%, 14%, 25% 44%,14%).

Discussão e Conclusões

O kit AlloSeq HCT apresentou alta sensibilidade, boa reprodutibilidade e correlação com o STR. É uma metodologia prática e acurada para a avaliação de quimerismo pós TCTH, porém revelou limitações em analisar amostras com apenas uma das referências.

Palavras Chave

Quimerismo; TCTH; kit AlloSeq HCT