Dados do Trabalho

Título

O TRATAMENTO COM PRONASE NAO REDUZ A EXPRESSAO DE HLA NOS LINFOCITOS E AUMENTA A SENSIBILIDADE DA PROVA-CRUZADA POR CITOMETRIA DE FLUXO

Introdução

O tratamento com pronase é utilizado na prova cruzada por citometria de fluxo (FCXM) para reduzir a fixação inespecífica de imunoglobulinas aos linfócitos B. Este estudo investigou o efeito da pronase sobre a expressão de moléculas HLA em linfócitos.

Material e Método

Os linfócitos foram purificados a partir de baço de doador falecido. FCXM (protocolo Halifaster) e estudos de adsorção/eluição foram realizados com células tratadas com pronase (2.35 U pronase/ml) (TP) e células não tratadas (NT), usando soro controle negativo (SCN), soro controle positivo (SCP) e dois soros com reatividade contra HLA-C (grupos C1 ou C2). Valores de median channel fluorescence (MCF) foram usados na análise do FCXM. Os eluatos foram analisados com o teste de Luminex single antigen bead (SAB) (One Lambda).

Resultados

O tratamento com pronase reduziu significantemente o background de linfócitos B (MCF médios de 228,8 vs. 467,1; p<0.001) e aumentou a detecção de anticorpos doador-específicos (DSA) no FCXM com linfócitos B (MCF de 379,4 vs. 124,4; p<0.001). Redução significante, embora de menor magnitude, ocorreu no background de linfócitos T. Todos os 13 (100%) FCXM B realizados com células TP foram positivos, enquanto 6/13 (46%) dos realizados com células NT foram falso-negativos. Testes de adsorção/eluição mostraram aumento significante do MFI dos DSA no teste SAB em eluatos de células TP em comparação com células NT (1,13 vezes, considerando anticorpos HLA classe I (p=0.004) e 1,24 vezes em MFIs considerando anticorpos HLA classe II (p=0.01).

Discussão e Conclusões

Os resultados mostram claramente que o tratamento dos linfócitos com pronase, em concentração de 2,35 U/ml, não afeta a expressão de moléculas HLA e é crítico para a detecção de DSA no FCXM B.

Palavras Chave

Pronase; ExpressãoHLA; Prova cruzada; Citometria de fluxo; Adsorção/Eluição

Área

HISTOCOMPATIBILIDADE/IMUNOGENÉTICA